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如何选择合适一颗的物镜

2020-06-02 16:28:31 汇骏科技 6
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不知道您在使用显微镜的过程中有没有遇到过同样的经历,看不到,看不清,或者看着不像呢?

出现这种情况的很大原因是使用了不合适的物镜,所以,选择一颗正确的物镜对显微观察来说至关重要。

1866年,科学家Ernst Abbe加入蔡司公司,首次提出了完善的显微成像理论,并在此基础上将显微镜进行了模块设计,现代意义上的物镜就在此刻应运而生。随着显微成像技术的不断发展,物镜种类的不断增多,适用的范围也在不断扩展,但任何一颗物镜都有其自身的优势和局限性,无法满足所有样品观测的需求。蔡司君和您一起看看从实际样品出发,该怎样选择合适的物镜。

从样品本身来说,可以分为非荧光染色样品荧光染色样品两大类,对于非荧光染色样品,往往是通过白光照明寻找感兴趣区域,而在此过程中可能会遇到一些困难。



贴壁细胞样品

由于贴壁细胞样品厚度薄且透光率高,很难直接观测到细胞轮廓。此时您可能需要选择增强对比度的方法和物镜来观测样品,如相差物镜

      

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相差PH物镜下的未染色细胞  清楚  Plan-Apochromat 20x/0, 8 Ph2

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非相差物镜下的未染色细胞 不清楚  Plan-Apochromat 20x/0, 8



具有折射性的样品

对于具有折射性的非荧光染色样品,如对骨骼,牙齿,晶体,淀粉粒及蛋固醇等进行观察时,您可能需要选择偏光物镜


偏光物镜下的晶体  EC Plan-Neofluar 20x/0, 5 Pol

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非偏光物镜下的晶体  EC Plan-Neofluar 20x/0, 5

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荧光标记样品
对于使用荧光染料或转染荧光蛋白标记的样品,通常使用宽谱激发光源配合荧光滤片等来观测不同波长的荧光信号,这类成像方法的特异性和对比度很好,但由于荧光信号强度较弱,想要更清楚地看到样品,就对物镜的光效率有一定要求,这时您要考虑选择荧光物镜

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荧光物镜下的肾组织切 亮 信噪比高 Plan-Apochromat 20x/0, 8

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非荧光物镜下的肾组织切片 暗 信噪比差 N-Achroplan 20x/0, 45 Ph2



  而除了样品自身,实验过程中样品载具也对物镜有着各种各样不同的要求。



盖玻片封片样品

当您观测有盖玻片的样品时,由于盖玻片厚度(标准值为0.17mm)会对成像效果产生影响,因此需要使用盖玻片覆盖差是0.17的物镜:

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盖玻片覆盖差是0.17mm的物镜 清楚  Plan-Apochromat 40x/1, 4 ∞/0.17

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盖玻片覆盖差是0的物镜 不清楚  A-Plan 40x/0, 65   ∞/0




无封片样品

       当您观测无盖玻片样品时,则需要使用覆盖差是0的物镜:


盖玻片覆盖差是0的物镜   清楚  A-Plan 40x/0, 65   ∞/0

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盖玻片覆盖差是0.17的物镜 不清楚  Plan-Apochromat 40x/1, 4 ∞/0.17

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多孔板培养的细胞样品

当您的细胞培养在培养皿或多孔板中时,对于厚度为0.17mm的玻璃底培养皿和多孔板,使用覆盖差是0.17mm的物镜即可,而对于底部较厚的培养皿和多孔板,可能会出现高倍物镜无法聚焦到样品上的情况,这是由于载具底板厚度超出物镜的工作距离造成的,这时就要考虑使用低倍物镜或长工作距离物镜

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LD-长工作距离物镜观察 可以聚焦  LD Plan-Neofluar 40x/0, 65

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非长工作距离物镜观察 无法聚焦  Plan-Apochromat 40x/0, 95


培养在溶液中的细胞样品

在使用培养皿或多孔板拍摄时,由于孔内加有培养液等液体试剂,进行高倍成像时还需要考虑物镜介质是否匹配,如在做水溶液中细胞三维成像时,水介质物镜比油介质物镜更适合,这样可以保证介质和样品溶液的折射率更加匹配,实际的成像效果会更好。而对于样品类型比较复杂的实验,也可选择多种介质混合物镜
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水镜观察水溶液中的活细胞  Plan-Apochromat 63x/1,2 Water

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油镜观察水溶液中的活细胞  Plan-Apochromat 63x/1,4 Oil


以上是常规实验中物镜的选择,如果上面没有提到您的应用或者您有特殊的样本及应用请联系我们。



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